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嗜碱性粒细胞脱颗粒实验——间接法

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发表于 07-06 15:03| 只看楼主| 倒序看帖| 发送站内信

其基本步骤介绍如下:

    材料和方法

    ①取SmL用辣根过氧化物酶免疫的兔血,放入含有肝素和EDTA硅化的塑料管中。10uL的血加90uL甲苯胺蓝染液,立即混匀,并在血球计数板内沉淀。血球计数可于血与染液混合5分钟至3小时之间完成。用200~250倍显微镜观察。兔血嗜碱性粒细胞数为400/ mm3。应用此法时,仅有嗜碱性粒细胞浆着色,色紫红,易于识别。其他白细胞核为深蓝,细胞浆不着色。

    ②嗜碱性粒细胞脱颗粒试验可用以下两种方式完成:将一定量的血在试管内与逐渐增加量的抗原混合,在37℃下孵育10分钟,用上述方法作细胞计数。第二种方法是将抗原先放人小滴定盘各孔内,待干后每孔加入10uL血。经振荡将小滴定盘置37℃下孵育10分钟,然后加入90uL染液。将每一孔内的标本移入血球计数板内,统计细胞数。每一组有一孔不加抗原,另有一孔加入不含钙质的抗原作为对照。

    ③在完成脱颗粒试验前,常将血用800 r/min离心10分钟,吸出血浆储存,将细胞再悬于无钙、镁,但含1×10-4 EDTA的Tyrode缓冲液中,洗二次后,一半标本再悬于有血浆的原血中,另一半悬于Tyrode缓冲液中。也可用采自辣根过氧化物酶做过免疫的兔血浆代替自家血浆。每一只兔血亦以一种无关的抗原进行试验,例如牛血清白蛋白。 .④每一标本必须重复计数,按以下方程式计算脱颗粒百分比:对照孔内嗜碱性粒细胞数一试验孔内嗜碱性粒细胞数×100

    对照孔内嗜碱性粒细胞数

    产生50010脱颗粒的抗原量用外推法(extrapolation)以微克(ug)计算。然后脱颗粒以任意单位表示,按以下方程式计算:

    1

    ——×100

    引起50%脱颗粒的抗原量(ug)

    ⑤嗜碱性粒细胞脱颗粒试验阳性反应为:细胞呈颗粒性肿大,球状消失,有颗粒脱落。有人认为至少要有30010的嗜碱性粒细胞出现脱颗粒现象方能认为是阳性(图9 -3A,图9-3B)。

    嗜碱性粒细胞脱颗粒试验很简单,任何一个试验室都可以做。但它也有不足之处,即只能测定病人在取血时的过敏状态,不能预示病人是否将发生过敏反应。

2#
发表于 07-06 15:03| 只看楼主| 倒序看帖| 发送站内信

原来这样啊!

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3#
发表于 07-06 15:05| 只看楼主| 倒序看帖| 发送站内信

原来这样啊!

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4#
发表于 07-07 07:25| 只看楼主| 倒序看帖| 发送站内信

不错,学到东西了

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